如何通過實驗確定大腸桿菌基因組的突變率
實驗開始，首先說明實驗的壹些必要步驟(註:幾乎每個小實驗都會用到的測試方法)。避免寫實驗報告過程中太多的混亂！而且這些過程並不是每個學生都參與的，所以寫在這個實驗報告的開頭。
(1)1%瓊脂糖凝膠的制備
稱取1g瓊脂糖，置於錐形瓶中，加入100mL 1×TAE緩沖液，微波爐加熱。完全融化後，取出搖勻。
(2)橡膠片的制備
1.用橡皮膏密封橡膠片兩端的邊緣。
2.將橡膠板放在水平位置，並放好樣品梳。
3.將冷卻到60℃左右的瓊脂糖凝膠慢慢倒入橡膠板中，註意不要產生氣泡。膠水的厚度在3到5毫米之間。
4.膠水凝固後，取出梳子，去掉膠布，放入電泳槽中(註意:梳子的方向靠近負極)。
5.在電泳槽中加入1 × TAE緩沖液，緩沖液應浸沒凝膠。
(3)添加樣本
1.向樣品中加入適量的10 ×上樣緩沖液，使緩沖液的最終濃度為1×。
2.使用微量移液器將添加了緩沖液的樣品添加到樣品裝載孔中。記錄添加樣品的順序和數量。(註意:在加樣過程中，不要讓樣品從加樣孔溢出)
(4)電泳
1.連接電泳槽和電泳儀的電源(註意DNA片段從負極向正極移動)。DNA的遷移速度與電壓成正比。最大電壓不超過5V/cm。
2.當溴酚藍染料移動到凝膠的2/3時，停止電泳。
(5)染色
將電泳後的凝膠浸入溴化乙錠染色溶液中(手套操作)。
(6)觀察實驗結果。
在紫外燈下(360 nm或254 nm)觀察染色的凝膠，在DNA處出現橙色熒光帶。
實驗1大腸桿菌基因組的提取
實驗目的
1.學習和掌握細菌基因組的提取方法。
實驗原理
DNA是壹種環狀大分子DNA，真核生物的DNA以染色體的形式存在於細胞核中。不同物種的生物和不同形態的細胞(如真菌、培養細胞、植物組織和動物組織)的基因組提取方法不同，但基本原理是相似的，即DNA要與蛋白質、脂類和糖類分離，DNA分子要保持完整。提取DNA的壹般過程是在含有十二烷基硫酸鈉(SDS)和蛋白酶K的溶液中消化分解蛋白質，然後用苯酚和氯仿/異戊醇提取分離蛋白質。用乙醇沈澱所獲得的DNA溶液，以從溶液中分離DNA。SDS的作用機理是能與蛋白質結合，中和蛋白質的電性，使蛋白質的非* *價鍵被破壞，二級結構喪失，導致變形失活。蛋白酶K的重要特點是在SDS和EDTA(乙二胺四乙酸二鈉)存在的情況下仍能保持較高的活性。在勻漿後提取DNA的反應體系中，SDS能通過滅活蛋白質破壞細胞膜和核膜，使組織蛋白與DNA分離；蛋白酶K能將蛋白質降解成小肽或氨基酸，使DNA分子完全分離。CTAB(十六烷基三乙基溴化銨)是壹種去汙劑，能溶解細胞膜，與核酸形成復合物。它溶於高鹽溶液(0.7摩爾/升NaCl)。當溶液的鹽濃度降低到壹定程度(0.3 mol/L NaCl)時，就會從溶液中沈澱出來，通過離心可以將CTAB-核酸復合物與蛋白質和多糖分離。最後用乙醇或異丙醇沈澱DNA，用乙醇或異丙醇溶解CTAB去除。
實驗材料
大腸桿菌DH5α菌液
實驗試劑
LB液體培養基，TE溶液，10%SDS，蛋白酶k，5mol/L NaCl，CTAB/NaCl。
溶液，苯酚/氯仿/異戊醇，異丙醇，70%乙醇
實驗儀器和設備
微量移液器、低溫離心機、水浴鍋、eppendorf管、恒溫搖床。
實驗步驟
(1)將培養至對數生長期的大腸桿菌DH5α溶液2mL以5000rpm冷凍離心10min，棄去上清液；
(2)加入190μL TE懸液沈澱，加入10%SDS，1μL 20mg/mL蛋白酶K，混勻，37℃保溫1h；；
(3)加入30μL 5mol/L氯化鈉，混勻；
(4)加入30μL CTAB/NaCl溶液，混勻，在65℃保溫20min；
(5)加入300μL苯酚/氯仿/異戊醇(25: 24: 1)提取，以5000rpm離心10min，將上清液移至幹凈的離心管中；
(6)加入300μL氯仿/異戊醇(24: 1)提取，取上清液移至幹凈試管中；
(7)加入300μL異丙醇，倒置混合，室溫靜置65438±00min，沈澱DNA；
(8)以5000rpm離心65438±00分鐘，沈澱DNA，加入500μL70%乙醇，以5000 rpm離心65438±00分鐘，棄去乙醇，吸幹；
(9)溶解於20μLTE中，取3μL用於瓊脂糖凝膠電泳驗證，其余保存於-20℃。
實驗結果和分析
10 9 8 7 6米
如圖，8號是這組的實驗結果。與maker相比，第壹條帶是正常的大腸桿菌基因組，中間可以看到兩條模糊的帶，可能是斷裂的基因組片段，最下面最亮的是RNA。基因組的斷裂可能是因為過於激烈的操作。該組電泳條帶依然清晰整齊，其他組的不規則條帶可能是電泳技術問題。RNA含量很高，所以有拖尾現象。
實驗2大腸桿菌感受態細胞的制備和驗證
實驗目的
1.掌握能力