測定原花青素含量所需的香蘭素濃度是多少？
該方法適用於各種植物組織、器官及其制劑(如葡萄籽、松樹皮提取物)中原花青素的測定。
1.方法總結
原花青素(也叫縮合單寧)是黃烷-3-醇的低聚物和聚合物，屬於多酚類物質。不同於其他酚類化合物，黃烷醇(縮合單寧、單體、二聚體等。)能在酸性介質中與香草醛反應生成在500nm處有最大吸收的有色物質，用比色法測定其含量。
2.工具
分光光度計。
3.試劑
所用的水是去離子水或相同純度的蒸餾水。
(1)香蘭素、甲醇、濃鹽酸都是分析純等級。
(2)純化的原花色素或兒茶素。
(3)4%香草醛甲醇溶液。
(4)標準使用液:將純化後的原花青素溶於蒸餾水中，制成1mg/mL的儲備液，將儲備液稀釋成濃度為1x10-2mg/ml至1mg/mL的標準使用液。標準溶液應在測定當天制備。
如果沒有純化的原花青素，可以用兒茶素代替，制備方法同上。
4.確定步驟
(1)樣品中原花青素的制備:植物材料用4倍量丙酮和水(7+3，體積比)或60%甲醇提取，在40℃以下減壓蒸餾除去有機溶劑，水相用乙醚洗滌至定容。
凍幹固體原花青素制劑直接溶於水(加入少量甲醇幫助溶解)制成原花青素溶液。
原花青素溶液儲存於5℃避光環境中備用。
(2)樣品測定:用錫紙將試管(14mm×20mm)包緊，只留加樣嘴。向管中加入0.5mL樣品，然後加入3.0ml 4%香草醛甲醇溶液混勻，再加入1.5mL濃鹽酸，混勻，室溫顯色15min。也可以在黑暗的環境下進行上述操作。最後在500nm處進行顏色對比。
可按上述步驟制作標準曲線(即0.1mg原花青素在500nm處的吸收值為0.55)。
5.成績統計
計算原花色素含量的公式，
原花青素(1×10-3mg)= A 500nm÷0.55×100×v。
其中v-樣品稀釋體積(倍數)。
6.筆記
(1)本方法的檢測範圍為(5~500)×10-3mg/0.5mL樣品溶液。精密度和準確度大於1×10-3mg。
(2)反應管應浸泡在洗滌劑中24小時，並徹底清洗。
(3)比色時，以水為空白。
(4)500nm處的OD值應控制在3以下。
(5)當樣品中原花青素含量較高時，應從有香草醛存在時測得的500nm值中減去無香草醛存在時測得的值。
(6)顯色液應避光放置。
方法2:保健食品中原花青素的測定。
1，原則
原花青素易溶於含羥基的溶劑，如甲醇。該方法是用甲醇提取樣品中的原花青素，加入鹽酸水解，然後轉化為深紅菁(C15H10O6 HCl)，再用高壓液相色譜法測定。
2.試劑:
2.1二氯甲烷的分析純度
2.2甲醇色譜純度
2.3異丙醇分析純度
2.4甲酸的分析純度
2.5鹽酸的分析純度
3.檢驗方法
3.1樣品稱取約500mg油溶性樣品於100ml錐形瓶中，加入5.0ml二氯甲烷，搖勻溶解。加入45.0ml甲醇，搖動5分鐘，然後通過20μm濾膜。取5.0毫升濾液於25毫升容量瓶中，加入5.0毫升3摩爾/升鹽酸，搖勻，用異丙醇定容至刻度。立即過5μm濾膜，取出壹部分放入試管中，塞上軟木塞，放入100±5℃的烘箱中水解45分鐘，然後取出，室溫靜置，進行液相色譜分析。
3.2標準除了在100ml錐形瓶中稱取25.0mg標準外，其他步驟相同。
3.3定量法標準曲線外標法定性定量分析。
4、色譜分析條件
4.1流動相:水:甲醇:異丙醇:甲酸=73:13:6:8。
4.2檢測波長:525納米
4.3色譜柱:島津Shim-Pak CLC ODS 15 cm× 6 mm。
4.4柱溫:35℃
4.5流量:1毫升/分鐘。