植物細胞懸浮培養系統的作用是什麽，如何建立？
植物細胞懸浮培養是指將植物細胞或較小的細胞團懸浮在液體培養基中，在培養過程中能保持良好的分散性。植物離體培養可以產生愈傷組織。松散的愈傷組織懸浮在液體培養基中，在振蕩條件下培養壹段時間後，可以形成分散的懸浮培養物。壹個好的縣浮培養應具備以下特征:(1)主要由單細胞和小細胞團組成；(2)細胞具有豐富的生長分裂能力，增殖速度快；(3)大多數細胞在形態上應具有分生組織細胞的特征。多數等徑，核質比大，細胞質致密，非整倍體程度低。
在液體懸浮培養的過程中，要及時註意細胞的繼代培養，因為當培養物生長到壹定時期，就會進入分裂的靜止階段。對於大多數懸浮培養，細胞在18 ~ 25天時達到最大密度，此時應進行第壹次繼代培養。在傳代培養中，應去除較大的細胞團塊和接種物殘留物。如果從植物器官或組織建立細胞懸浮培養系統，它包括愈傷組織誘導、繼代培養、單細胞分離和懸浮培養。目前，該技術已廣泛應用於細胞形態、生理、遺傳和雕亡的研究，特別是為基因工程在植物細胞水平上的操作提供了理想的材料和途徑。將轉化的植物細胞誘導分化形成植株，並獲得攜帶目的基因的個體。
主要試劑:
B5培養基加0.2mg NAA(萘乙酸)液體培養基(取3.2g B5粉末培養基，30g蔗糖，200ul體積質量為65438±0mg/ml的NAA原液，溶於約800ml蒸餾水中，置於磁力攪拌器中，混勻，用pH計測pH值。用1mol/l KOH調節pH值至5.8，加蒸餾水定容至1L，用鋁箔紙封口，121℃滅菌20min，4℃冰箱保存，接種前水浴或自然升至室溫)。
主要設備:
1.凈化臺
2.加壓釜
3.旋轉振動器
4.水浴鍋
5.倒置顯微鏡
6.鑷子
酒精燈
8.三角瓶
9.移液管
10.pH計
11.恒溫培養室
12.煙囪
13.不銹鋼屏
14.血細胞計數板等。
實驗材料:
擬南芥愈傷組織
實驗步驟:
1.用鑷子取出旺盛柔軟的胼胝，放入三角瓶中，輕輕捏碎。每100ml三角瓶中裝有10~15ml滅菌培養基，每瓶接種1~1.5g愈傷組織，保證初始培養有足夠的細胞。
2.將接種過的三角形放在旋轉搖動器上。在65438±000轉/分、25～28℃的條件下進行搖瓶培養。
3.培養6~10天後，若細胞增殖明顯，可在培養瓶中加入10ml新鮮培養基，必要時用大口吸管將培養物分兩瓶繼續培養。(如果細胞沒有明顯增殖，可能是起始材料不合適，應考慮在旺盛增殖期重新接種愈傷組織)。可以進行第壹次繼代培養。
4.懸浮培養的過濾:按“3”法傳代培養幾代後，培養液應主要由單細胞和小細胞團組成(不超過20個細胞)。如果還含有有效的大細胞團，可以用適當孔徑的金屬網篩過濾，然後將過濾後的縣內漂浮細胞繼續培養。
5.細胞計算。取壹定體積的細胞液，加入兩倍體積的8%三氧化鉻(CrO3)，置於70℃水浴中65438±05min。冷卻後，用移液管反復吹細胞懸液，使細胞充分分散。混合後，取壹滴縣液，放在血細胞計數板上計數。
6.制作細胞生長曲線:為了了解縣城漂浮培養細胞的生長動態，可采用以下方法繪制生長曲線:
1)鮮重法在傳代培養的不同時間，取壹定體積的懸浮培養物，離心收集後，稱重細胞鮮重，以鮮重為縱坐標，培養時間為橫坐標，繪制鮮重的生長曲線。
2)幹重法可以在稱重鮮重後將細胞幹燥，然後稱重幹重。以幹重為縱坐標，培養時間為橫坐標，繪制細胞幹細胞再生曲線。
以上兩種方法需要每兩天取樣壹次，* * *七次，每個樣品重復三次。在整個實驗過程中，沒有新鮮的培養液被換入培養瓶中。
7.細胞活力的檢查。對於初學者來說，經常需要檢測活細胞的比例。在培養的不同階段，可以吸取壹滴細胞液放在載玻片上，滴壹滴0。用1%苯酚藏紅花溶液(用培養基制備)染色，並在顯微鏡下觀察。有幾個活細胞是不著色的，而死細胞很快就被染成紅色。也可以用0。用1%熒光二乙酸鹽溶液染色，所有活細胞在紫外光的誘導下都會呈現藍色熒光，有經驗的操作者可以根據細胞形態和胞質循環來判斷細胞的生死。
8.細胞再生能力的鑒定:為了知道懸浮培養的細胞是否還有再生能力，可以將培養的細胞轉移到瓊脂固化的培養基上，使基部再次形成愈傷組織，然後在分化培養基上誘導植株的分化。
註意事項:
1.以上步驟均為滅菌，培養基、器皿、用具均高壓滅菌後方可使用。
2.如果培養基渾濁或呈乳白色，說明已經被汙染。
3.在每次傳代培養過程中，要在倒置顯微鏡下觀察培養物中的各種細胞和其他殘留物，有意識地留下圓形細胞，丟棄長細胞。