分子雜交的化學原理是形成
分子雜交,即確定單鏈核酸堿基序列的技術。
其基本原理是待測單鏈核酸與已知序列的單鏈核酸(叫做探針)間通過堿基配對形成可檢出的雙螺旋片段。
這種技術可在DNA與DNA,RNA與RNA,或DNA與RNA之間進行,形成DNA-DNA,RNA-RNA或RNA-DNA等不同類型的雜交分子。
分子雜交基本原理
(壹)DNA變性
DNA變性是指雙螺旋之間氫鍵斷裂,雙螺旋解開,形成單鏈無規則線團,因而發生性質改變(如粘度下降,沈降速度增加,浮力上升,紫外吸收增加等)。
(二)復性
變性DNA只要消除變性條件,二條互補鏈還可以重新結合,恢復原來的雙螺旋結構,這壹過程稱為復性。
(三)退火
通常DNA熱變性後,將溫度緩慢冷卻,並維持在比Tm低25~30℃左右時,變性後的單鏈DNA即可恢復雙螺旋結構,因此,這壹過程又叫做退火。復性後的DNA,理化性質都能得到恢復。倘若DNA熱變後快速冷卻,則不能復性。
DNA分子雜交的意義
分類學上不同物種的DNA分子之間可以進行分子雜交,但是,遠緣物種的DNA分子之間進行雜交分子的可能性遠比近緣物種的要小得多。例如,細菌與真核細胞DNA分子之間形成雜交分子的可能性很小.