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甲基化特異性PCR的甲基化特異性PCR

其基本原理是用亞硫酸氫鈉處理基因組DNA,未甲基化的胞嘧啶變成尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不變。因此從理論上講,用不同的引物做PCR,即可檢測出這種差異,從而確定基因有無CpG島甲基化。根據目的基因修飾前後的改變,就可以相應設計M和U引物,有時我們需要設計兩輪引物。擴增產物用DNA瓊脂糖凝膠電泳,凝膠掃描觀察分析結果。

這種方法靈敏度高,無需特殊儀器,因此經濟實用,是目前應用最為廣泛的檢測方法。不過也存在壹定的局限性,預先需要知道待測片段的DNA序列,引物的設計非常重要。另外,亞硫酸氫鹽處理也十分關鍵,若處理不完全則可能導致假陽性的出現。