瓊脂糖凝膠的濃度如何選擇?解決
對於目標產物大小為80BP的片段,可以用2.0%瓊脂糖凝膠進行電泳。瓊脂糖和TAE的量與您運行的樣品數量有關,因為樣品數量決定了您凝膠罐的體積,凝膠罐的體積決定了TAE和瓊脂糖的量。例如,如果妳的凝膠罐的體積是20毫升,那麽如果妳想混合2.0%的凝膠,妳需要20毫升。
做膠的時候要註意充分溶解瓊脂糖,煮沸。同時,我們還應該註意TAE在煮沸過程中的蒸發。剛做膠水的時候,放在燒瓶裏煮,差點蒸發掉。然後,加EB的時候不要熱,因為高於70度的時候,EB會升華蒸發,如果太冷,EB的濃度會不均勻;因為EB是致癌物,操作時壹定要註意自我保護;然後要清理膠槽,梳齒壹定要放直,以免不規則跑出皮帶。
跑膠時間與電壓成反比,電壓與電泳槽兩電極距離成正比,壹般小於5V/cm。因為妳的片段很小,很有可能無法與引物二聚體區分,所以妳再跑電泳的時候要適當延長時間,讓溴芬指示帶跑滿凝膠的三分之二,因為時間長了二聚體會跑掉,而目的產物不會。