考馬斯亮藍法測定牛血清蛋白的標準曲線？
第壹，標準曲線
壹般用分光光度法測定壹種物質的含量，要先做標準曲線，然後根據標準曲線就可以查出被測物質的含量。因此，制作標準曲線是生物檢測和分析的壹項基本技術。
二、蛋白質含量測定方法
1、凱氏定氮法
2.縮二脲法
3.福林酚試劑法
4.紫外線吸收法
5.考馬斯亮藍法
三、考馬斯亮藍法測定蛋白質含量-標準曲線的制作。
(1)試劑:
1，考馬斯亮藍試劑:
考馬斯亮藍G-G—250 100mg溶於50ml 95% 95%乙醇中，加入100ml 85% h3po 4，用蒸餾水稀釋至1000ml，用濾紙過濾。最終試劑包含0.01%(W/V)考馬斯亮藍G-250、4.7% (w/v)乙醇和8.5%(W/V)H3PO4。
2.標準蛋白質溶液:
預先用凱氏定氮法測定純牛血清白蛋白的含氮量，根據其純度用0.15mol/LNaCl配制成100ug/ml的蛋白溶液。
(2)、設備:
1和722S分光光度計的使用和原理()。
2、移液管使用()。
(3)、標準曲線制作:
試管編號0 1 2 3 4 5 6
100微克/毫升標準蛋白(毫升)
0.15摩爾/升氯化鈉(毫升)1 0.9 0.8 0.7 0.6 0.5 0.4
考馬斯亮藍試劑(毫升)5 5 5 5 5 5 5
搖勻，在1h內取1管作為空白對照，在595nm處比色。
A595nm納米
1、
2.以595nm為縱坐標，標準蛋白含量為橫坐標(六個點分別為10ug，20 ug，30 ug，40 ug，50 ug，60 ug)，在坐標軸上畫壹條標準曲線。
1)，用標準曲線找出回歸方程。
2)用公式計算回歸方程。
3)，或者用原點畫出測量回歸直線方程。即A595nm=a×X( )+6。
壹般相關系數應大於0.999，至少有兩個大於9。
4)作圖時，在壹條直線上作近兩點，直線上的點應在直線的兩側。
(4)蛋白質含量的測定:
按照操作步驟1操作樣品，即被測蛋白質含量(含量應在測定範圍內)的樣品，測量樣品的A595nm，然後用標準曲線或回歸方程計算樣品的蛋白質含量。
壹般被測樣品的A595nm值在0.1-0.05之間，所以如果上述樣品的A595nm值過大，可以稀釋後測得A595nm值再計算。
(5)、註意事項:
1，玻璃儀器要洗幹凈。
2、量要準。
3、玻璃儀器要幹燥，避免溫度變化。
4.對照:用供試品以外的物質作為空白對照。
藥物的制備(磷酸鹽緩沖液的制備)
壹、藥物的制備步驟
(壹)、實驗準備:
1，準備好必要的藥物和玻璃儀器。
2、洗滌。(怎麽洗幹凈？)
(2)、計算:
1，百分比濃度計算:
1)，G/V比
例如，用1% NaCl，將1g NaCl溶於100ml水中。
2)體積/體積比:
比如75%乙醇100ml，75% × 100% = 100% × x，x = 75 ml。取75毫升無水乙醇，加入25毫升蒸餾水。
乙醇:乙醚:丙酮= 2: 1: 2加500毫升，各200毫升，100毫升加200毫升混合。
3)G/V比:用的比較少，比如計算灰分中Fe等壹種元素的含量。
2.摩爾濃度的計算:註:藥物的分子量壹般在標簽中註明。
1)、0.1M或0.1mol/L NaCl與100ml。
M=質量/體積(L)稱取NaCl 0.1×0.1×40 = 0.4g摩爾數=G(g)/摩爾質量。
2)、0.1mMNaCl帶100ml。
MM=毫摩爾/體積(L)稱取氯化鈉0.1× 0.1× 40 = 0.4g。
毫摩爾=克(毫克)/摩爾質量
3)，0.1 unacl帶100ml
MM=微摩爾/體積(L)稱取NaCl 0.1× 0.1× 40 = 0.4毫克。
微摩爾數=G(ug)/摩爾質量:NaCl 0.1×0.1×40 = 0.4 ug。
3、混合溶液制備的計算:
如果制備3uMEDTA、2.25mM NBT和60uM溶液(100ml)，則用50mM磷酸鹽緩沖液制備。
註:1。單獨計算校準體積。
2.分別混合，但總體積不能是100ml。
(3)、標量:
1，根據需要根據要求選擇不同的刻度來測量不同精度的儀器，如量筒或移液管。
2、電子分析天平的使用。
(4)解散:
1，根據藥物配置要求選擇溶劑。蒸餾水、雙蒸水、去離子水等。
2、只能在燒杯中溶解。註意，溶劑只能加到總體積的2/3左右，剩下的溶劑用來清洗燒杯三次左右，直到幹凈為止。
常識:壹般在藥品標簽上標註藥物的溶解度和分子式，根據分子式和所學的常識可以判斷藥物的結構和性質(包括溶解度)。
例如在酸堿兩性物質(AA、蛋白質、核苷酸等)的制備中。)，如果溶解性不好，可以用稀酸或稀堿促進溶解，但pH值要在要求的範圍內。
3、加熱促進溶出，但需要註意的是，有些藥物要在制劑範圍內的水中加熱。如:0.1%澱粉，水加熱(溫度80-90℃)。c)，太多會糊化。
(5)、恒定體積:
1，用容量瓶定容；
2.用玻璃棒或用小漏鬥瀝幹；
3.把溶劑加到秤上，然後用滴管加到秤上。要求刻度與液體的凹面相切(肉眼可見)；
4、上下洞穴容量瓶幾次，並混合均勻。(註意體積不再恒定，以防溶液遺漏。)
(6)、裝在試劑瓶中，貼上標簽。
標簽應註明以下內容:藥物濃度、名稱、制備人、制備日期等。
(7)清理實驗現場。
第二，磷酸鹽緩沖液的制備。
(1)制備pH值為0.2 m = 6.8的0.2mol/L磷酸鹽緩沖液。磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉用作緩沖劑。
選用藥物:Na2HPO412H2O(堿)和NaH2PO412H2O(酸)配100ml緩沖液。這本書解釋了。
(2)、計算:
1，註:書上有規定的數量。
2.計算:Na2HPO412H2O為71.64×0.1 = 7.164g。
NaH2PO412H2O是31.21×0.1 = 3.121g。
3.用不同結晶水轉換。
書上配的是1/15mol/L緩沖液，10 L，書上用Na2HPO412H2O需要11.87g/L，但是用Na2HPO412H2O需要多少g？
11.87 =(178/358)×X，X=23.87g .
(3)分別準備100ml緩沖液(根據需要確定準備量)。
即:0.2M Na2HPO42H2O和NaH2PO42H2O100ml。
(4)、按書上的量準備，然後混合。
比如pH=6.8，緩沖液分別是49ml和51ml。
(5)用pH試紙檢查配置是否準確。
(6)如果pH = 6.8的50 mm緩沖液為100ml，可以用妳的母液稀釋。
計算:50×0.1 = 0.2×1000×x(L)；X = 0.025L
取25ml 0.2M pH = 7.2的緩沖液，用蒸餾水定容至100ml。