PCR擴增後如何通過瓊脂糖電泳回收純化目的基因?希望高手指教!
妳可以使用回收工具包。例子如下:
DNA的回收使用AXYGEN公司的AxyPrep DNA凝膠回收試劑盒,回收步驟如下:
1.在紫外燈下切下含有目的DNA的瓊脂糖凝膠,用紙巾吸幹凝膠表面的液體,切碎。計算凝膠重量(事先記錄1.5 ml離心管的重量),視為凝膠體積(如100 mg=100 μl體積);
2.加入3倍凝膠體積的緩沖液DE-A,混勻後在75℃加熱,間歇攪拌(每隔2-3分鐘),直至凝膠塊完全熔化(約6-8分鐘);
3.加入0.5緩沖液DE-B,混勻;
4.吸取步驟3中的混合溶液,轉移至DNA制備管(置於試劑盒提供的2 ml離心管中),離心12000×g 1min,棄去濾液;
5.將制備管放回2 ml離心管中,加入500 μ l緩沖液W1,12000×g離心30 s,棄去濾液;
6.將制備管放回2 ml離心管中,加入500μl緩沖液W2,12000×g 30s,棄去濾液,再次用700 μl緩沖液W2洗滌12000×g 1min;同理;
7.將制備管放回2 ml離心管中,離心12000×g 1分鐘;;
8.將制備管置於幹凈的1.5 ml離心管(試劑盒中提供)中,向制備膜中心加入25-30μl稀釋液,在室溫下靜置1 min,在12,000×g下離心1 min以洗脫DNA。
如果碎片比較大,比如幾千kb以上,建議使用promega公司的回收套件,效果更好。
回收工具包中有具體步驟的說明。