微生物生長的幾種檢測方法
1.1體積測量法:又稱菌絲體濃度測量法。
通過測量壹定體積培養基中所含菌絲的數量，可以反映微生物的生長狀況。方法是取壹定量的待測培養液(如10 ml)置於帶刻度的離心管中，設定壹定的離心時間(如5分鐘)和轉速(如5000rpm)，離心後倒出上清液，測得上清液體積為V，菌絲體濃度為(10-V)/65438。菌絲體濃度的測定是大規模工業發酵生產中微生物生長的重要監控指標。這種方法廣泛、簡單、快速，但需要設定壹致的處理條件，否則偏差會很大，因為離心沈澱中混有壹些固體營養物，結果會有些偏差。
1.2幹重法:
它可以通過離心或過濾來確定。壹般幹重是10-濕重的20%。離心法是將壹定體積待測培養液倒入離心管中，設定壹定的離心時間和轉速，離心，用清水離心洗滌1-5次，幹燥。幹燥可在105℃或100℃的烘箱中進行，或通過紅外線，或通過80℃或40℃的真空幹燥，然後稱重。如果用過濾法，絲狀真菌可以用濾紙過濾，細菌可以用醋酸纖維素膜等濾膜過濾。過濾後，用少量水洗滌，並在40℃真空幹燥。叫幹繁殖法很復雜。通常，當獲得的微生物產物為菌體時，常采用這種方法，如活性幹酵母(ADY)，壹些以微生物菌體為活性物質的飼料和肥料。
1.3比濁法:
微生物的生長導致培養物濁度增加。用紫外分光光度計測量某壹波長的光吸收值來判斷微生物的生長情況。壹個帶有側臂的特殊三角瓶可以用來定期跟蹤培養物中細菌的生長。將側臂插入光電比色計比色座的孔中，無需取菌液即可隨時測定其生長情況。這種方法主要用於監控發酵工業中細菌的生長。比如我用的是UNICO公司的紫外可見分光光度計，用比色管在波長600nm處定時測量發酵液的吸光度值OD600，來監測大腸桿菌的生長和誘導時間。
1.4菌絲長度測量方法:
對於絲狀真菌和某些放線菌，可以在培養基上測定壹定時間內菌絲生長的長度，也可以用壹端開口、帶刻度的細玻璃管進入合適的培養基，躺下，在開口的壹端接種微生物，壹段時間後記錄菌絲生長的長度，來測定絲狀微生物的生長情況。
二、微生物計數法
2.1血細胞計數平板法:
血細胞計數板是壹種具有特殊結構尺度和厚度的厚玻璃板。載玻片上有四個凹槽和兩個脊，中央有壹個短的水平凹槽和兩個平臺。兩個脊的表面比兩個平臺高0.1mm。每個平臺上刻有不同規格的格子，中心0.1mm2的面積上刻有400個小方塊。用油鏡觀察，統計某個大細胞中的微生物數量，就可以計算出1 ml菌液中所含的細菌數量。這種方法簡單、直觀、快速，但只適用於對單細胞微生物或絲狀微生物產生的孢子進行計數，結果是包括死細胞在內的細菌總數。
2.2染色計數法:
為了彌補某些微生物在油鏡下不易觀察計數，血細胞計數平板法無法直接區分死細胞和活細胞的不足，人們發明了染色計數法。借助不同的染料，在顯微鏡下可以更方便地計數活菌。例如，可以用亞甲藍染色液來計數酵母活細胞的數量。染色後，活細胞無色，死細胞藍色。
2.3比例計數法:
將顆粒濃度已知的液體(如黴菌孢子或紅細胞)和待測細胞濃度的菌液按壹定比例均勻混合，在顯微鏡視野內通過計數各自的數量即可得到未知菌液的細胞濃度。這種計數方法比較廣泛。並且有必要制備具有已知顆粒濃度的懸浮液作為標準。
2.4液體稀釋法:
未知細菌樣本被連續稀釋10倍。根據估算，從最合適的10倍連續三次稀釋中取5 ml樣本，然後接種到含***15培養基的三組試管中。培養後，記錄每個稀釋度下生長的試管數，然後檢查最大概率表MPN(mostparylnumber)。這種方法常用於檢測食品中的微生物，如飲用水和牛奶的微生物限度檢查。
2.5平板菌落計數法:
這是最常用的活菌計數方法之壹。對待測菌液進行梯度稀釋，取壹定量
固化前，將稀釋後的菌液與適當的固體培養基混合均勻，或將菌液塗布在固化後的固體培養基平板上。孵育後，原始細菌溶液的細菌計數可以通過將平板上出現的菌落數乘以細菌溶液的稀釋度來計算。壹般直徑9cm的平板上出現50-500個菌落。但方法比較麻煩，操作者需要熟練的技術。平板菌落計數法不僅可以得到菌液中的活菌數，而且可以壹次分離培養菌液中的細菌，得到單克隆。
2.6試紙法:
在平板計數法的基礎上，開發了用於快速計數的小型商用產品。有小而厚的濾紙片，瓊脂片等。在濾紙和瓊脂上吸取合適的培養基，加入活性指示劑2，3，5-氯化三苯基四氮唑(TTC，無色)浸泡試驗菌液，然後在密封包裝袋中培養。短期培養後，濾紙上出現具有壹定密度的玫瑰色小菌落，對照標準紙色板上的光譜，即可估算出樣品的細菌含量。試紙計數法快速準確，避免了平板計數法的人為操作誤差。
2.7薄膜過濾法:
用特制濾膜過濾壹定體積的含菌樣品，用橙色染色，在紫外顯微鏡下觀察細胞的熒光。活細胞會發出橙色熒光，而死細胞會發出綠色熒光。
2.8生理指數法:
微生物的生長伴隨著壹系列生理指標的變化，如pH值、發酵液中的含氮量、含糖量、產氣量等。與生長平行的生理指標有很多，可以作為生長測量的相對值。
2.9氮含量的測定:
大多數細菌的含氮量為12.5%幹重，酵母為7.5%，黴菌為6.0%。根據含氮量×6.25，可以確定粗蛋白的含量。測定氮含量的方法有很多，如硫酸消化法、高氯酸消化法、碘酸消化法、磷酸消化法和杜馬斯法測定N2氣體。杜馬斯測量N2氣體的方法是將樣品與CuO混合，在CO2氣流中加熱，產生氮氣，收集在呼吸計中，用KOH吸收CO2後測量N2的量。
2.10碳含量的測定:
將少量生物材料(0.2-2.0毫克幹重)混合到1毫升水或無機緩沖液中，用2毫升2% K2Cr2O7溶液在1000℃加熱30分鐘，然後冷卻。加水稀釋至5 ml，在580nm波長處讀取吸光度值，計算生長量。需要使用試劑作為空白對照，使用標準樣品作為標準曲線。
2.11還原糖測定方法:
還原糖通常指單糖或寡糖，在微生物生長的條件下可以生長(在mHg中復制)。它們有完整的呼吸鏈，以分子氧為最終氫受體，有超氧化物歧化酶(SOD)和過氧化氫酶。
兼性厭氧菌:是壹種主要在好氧條件下生長，也能在厭氧條件下生長的微生物，有時稱為兼性好氧菌。
微需氧菌:只有在微妙的氧分壓(1.33~3)下才能正常生長的微生物。Pa，正常大氣中的氧分壓為0.2bar)。
好氧菌:好氧厭氧菌的簡稱，是壹種在分子氧存在下，能進行發酵厭氧生活的厭氧菌。
厭氧菌:有壹般厭氧菌和嚴格厭氧菌(專性厭氧菌)。
超氧陰離子自由基:活性氧的壹種形式，由於奇數電子而帶負電荷；它同時具有分子和離子性質；其性質極不穩定，化學反應性極強。它能破壞細胞內各種重要的生物大分子和膜結構，並形成其他活性氧化物，所以對生物體的危害極大。
超氧化物歧化酶(SOD):壹種保護需氧細菌免受超氧陰離子自由基侵害的酶。根據SOD分子中所含金屬輔助基團的不同，可分為三類:1，含Cu、Zn的SOD，幾乎存在於所有真核生物的細胞質中；2.含鐵的SOD主要存在於原核生物中；3.含錳的SOD主要存在於真核生物的線粒體中。SOD除了清除超氧陰離子自由基外，還被發現在防治人體衰老、自身免疫性疾病、抗癌、預防白內障、放射病和肺氣腫、解除苯中毒等方面具有壹系列療效。
PRAS培養基:經嚴格厭氧方法配制、包裝、滅菌的厭氧菌培養基稱為預還原厭氧滅菌培養基，即PRAS培養基。
厭氧池:培養厭氧菌的裝置。
亨蓋特滾管技術:壹種研究嚴格厭氧菌的技術和裝置，集制備高純氮氣、用氮氣驅氧和實現全程厭氧操作、厭氧培養、厭氧檢測於壹體。
厭氧手套箱:用於厭氧操作和培養嚴格厭氧菌的箱形密閉裝置。
搖瓶培養:壹般三角瓶中培養液的瓶口用8層紗布包裹，以利於通風，防止雜菌汙染，同時減少瓶內液體含量，放在往復式或旋轉式搖床上進行有節奏的振動，以提高溶氧。
曲:是用麩皮、米糠等疏松固體營養物接種培養微生物制成的壹種好氧活菌產品。
酒曲培養:將麩皮、碎麥或豆餅等固體基質煮熟後自然接種，然後薄薄地鋪在培養容器表面，使微生物得到足夠的氧氣，有利於散熱，對真菌來說，也有利於產生大量孢子。
通風制曲:機械化程度高、生產效率高的現代化大規模制曲技術，在我國醬油釀造行業廣泛應用。
汙染:有害微生物通過氣流、水流、接觸和人工接種傳播到適宜的基質或生物物體上，造成各種危害。
巴氏殺菌法:微生物學家巴斯德用於果酒的消毒，因此得名。這是壹種專門用於牛奶、啤酒、果酒、醬油等不適合高溫殺菌的食品或調料的低溫消毒方法(壹般在60-85度處理30min至15s)。有兩種方法:1和低溫養護；2.高溫瞬變法。
分步滅菌:適用於不耐熱培養基的滅菌。方法如下:將滅菌後的培養基在80-100℃下煮沸15-60分鐘，以殺滅其中的所有微生物營養成分，然後在37℃的室溫下保存。
晚上，剩余的孢子被誘導萌發，然後第二天以同樣的方式煮熟並保溫過夜。這可以重復3天，以在較低的滅菌溫度下達到相同的完全滅菌效果。
連續加壓蒸汽滅菌法:培養基在管道流動過程中被迅速加熱、維持和冷卻，然後流入發酵罐。
美拉德反應:高溫滅菌時，培養基中氨基化合物(氨基酸、肽、蛋白質)的遊離氨基與羧基化合物(糖類)的羰基發生復雜的化學反應，導致培養基褐變，相關營養成分減少，應避免。
碳酸系數:在壹定時間內能殺死所有受試細菌的最高稀釋度的石炭酸與達到相同效果的最高稀釋度的比值。
抗生素:微生物或其他生物在生命活動中合成的壹類代謝產物或其人工衍生物。它們在很低的濃度下就能始終或幹擾其他生物的活力，因此可以作為化療藥物，具有雙重作用。
抗代謝藥物:壹類化學物質，在化學結構上與細胞中的基本代謝物相似，並能幹擾正常的代謝活動。三作用:1，與正常代謝產物爭奪酶的活性中心，使微生物正常代謝所需的重要物質不能正常合成，如磺胺類藥物；2.“偽造”正常代謝產物，讓微生物合成無法正常發揮功能的假產物。比如8-重氮鳥嘌呤代替鳥嘌呤合成的核苷酸會產生RNA沒有正常功能；3.壹些抗代謝藥物在結構上類似於生化合成途徑的終產物，並且可以通過反饋調節破壞正常的代謝調節機制。例如，6-巰基腺嘌呤可以抑制腺嘌呤核苷酸的合成。
選擇毒力:壹種比病原菌毒性更強，對宿主基本無毒的化學物質，以抑制病原微生物在宿主體內的生長繁殖，從而達到治療宿主感染性疾病的壹種措施。