質粒小量提取跟大量提取有什麽區別
區別:
1、所需菌液不同。大提用於大量菌液的提取,100ml-500ml 均可,而小提用的菌液量很少,壹般1.5-5ml。
2、純度不同。壹般試劑盒中大提比小提多了溶菌酶、異丙醇(回收沈澱核酸)、含壹定量PEG的氯化物(回收質粒DNA)及乙酸銨等,其作用及目的都是有利於細菌的裂解和質粒的純化,所以大提的產物比小提的量多很多,而且純度很高。
3、實驗要求不同。小提壹般用於質粒鑒定和對純度要求不是很高的實驗,大提用於質粒的大量提取和轉染等純度要求很高的實驗。
擴展資料:
大提質粒和小提質粒的基本原理是壹樣的,都是通過壹定的方法(如加堿裂解)使在細菌內大量擴增的質粒釋放出來,然後經過去蛋白去RNA等壹系列步驟純化DNA,最終將DNA提取出來。
選用質粒(最常用)做載體的4點要求:
1)選分子量小的質粒,即小載體(1-1.5 kb)→不易損壞,在細菌裏面拷貝數也多(也有大載體);
2)壹般使用松弛型質粒在細菌裏擴增不受約束,壹般 10 個以上的拷貝,而嚴謹型質粒 < 10 個。
3)必需具備壹個以上的酶切位點,有選擇的余地;
4)必需有易檢測的標記,多是抗生素的抗性基因,不特指多位 Ampr(試壹試)。
無論選用哪種載體,首先都要獲得載體分子,然後采用適當的限制酶將載體 DNA 進行切割,獲得分子,以便於與目的基因片段進行連接。
百度百科_質粒抽提