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木瓜蛋白酶活性的測定

該方法僅適用於木瓜蛋白酶。1.底物溶液:準確稱取1.42g N-苯甲酰基-L-精氨酸乙酯鹽酸鹽,加入10 mmol/L LED TA,50 mol/L半胱氨酸溶液,加入適量水,用0.1mol/L氫氧化鈉溶液調節pH至6.2,最後定容。

2.待測酶溶液:將樣品用水稀釋至適當濃度,調節至pH6.2,在25℃恒溫下,將25mL燒杯放在自動pH滴定儀上,加入3.75mL底物溶液、2.50ml 3mol/L氯化鈉溶液和1.25mL蒸餾水,混合後立即用0.1mol/L氫氧化鈉在電磁攪拌下連續滴定至pH6.2,記錄每分鐘0的消耗量。同時進行空白校正。根據下列公式計算木瓜蛋白酶的活性p(單位/毫克):

p = CδV 1000/W

式中:c:氫氧化鈉溶液的濃度,mol/l;δ v:每分鐘消耗的氫氧化鈉溶液體積減去空白值;w:反應溶液中木瓜蛋白酶的質量,mg。